Tulossa Schizophyllum Commune: Luo steriili kulttuuri löydetyistä sienistä: 3 vaihetta (kuvilla)

2024 Kirjoittaja: John Day | [email protected]. Viimeksi muokattu: 2024-01-30 09:03

Tässä ohjeessa keskitytään selittämään, kuinka luoda Schizophyllum Commune -sienen (yleinen nimi Split Gill -sieni) steriili kulttuuri Petri -maljalle käyttämällä löydettyjä sieniä. Schizophyllum Commune on todettu yli 28 000 sukupuolesta, sitä voi esiintyä kaikilla mantereilla paitsi Etelämantereella, ja sillä on kyky (kuten muillekin "valkoisille ja ruskeille mätäsienille") heikentää hormonitoimintaa häiritsevää saastumista (muovit, hormonit, jotka jäljittelevät teollisia petrokemikaaleja, kuten lannoite Atrazine, pehmitin Bisphenol-A tai synteettinen hormoni Diethylstilbestrol).

Käyn läpi luonnonvaraisten sienien tunnistamistekniikoita, ravinteisen agar -petrimaljan valmistamisen ja löydettyjen sienien käyttämisen steriilin eristetyn viljelyn kasvattamiseen petrimaljassasi. Muut tämän sarjan ohjeet sisältävät tekniikoita, kuten sienien geneettisen tunnistamisen, yksinkertaiset entsymaattiset testit, joilla testataan sienen kyky hajottaa muovit ja hormonien jäljitteleminen, sekä juuston valmistus S. Commune -ohjelmalla.

Tämä projekti syntyi Mary Maggicin, Paula Pinin ja minun yhteisestä työstämme HANGARin residenssissä Barcelonassa Espanjassa syksyllä 2018. Lisätietoja projektista lue ~ ~ tai ohita kaikki Bla Bla ja siirry suoraan vaiheeseen 1 opetusohjelmaan:)

Kuvat ovat Schizophyllum Commune Fanzine ~ -tiedostoista, jotka voit ladata ilmaiseksi täältä

Residenssin aikana kolme päätavoitettamme olivat:

1 ~ Tutki ja sulauta tieteellistä kirjallisuutta Schizophyllum Commune -yhdistelmästä ja sen erilaisista vuorovaikutuksista hormonien ja hormonitoimintaa häiritsevien petrokemian epäpuhtauksien kanssa. S. Commune on yksi monista "valkoisen ja ruskean mädän" sienistä, jolla on kyky hajottaa hormonaalista ja hormonitoimintaa häiritsevää saastumista. Nämä sienet ruokkivat puita erittämällä "lignoselluloosa" entsyymejä verkostoituneista elimistä tai "myseeleistä", ja entsyymit kykenevät hajottamaan selluloosan ja ligniinin, joista puut on tehty. Selluloosan, ligniinin ja EDS -hormonien, kuten Atratsiinin, BPA: n, Estradiolin, Dietyylstilbestrolin ja Nonyylifenolien, rakenteellisten samankaltaisuuksien vuoksi sienien erittämät "lignoselluloosa" -entsyymit voivat myös hajottaa monenlaisia myrkyllisiä aineita. Tämän lisäksi S. Commune tuottaa immunostimuloivia polysakkarideja, jotka ovat hyödyllisiä syövän ehkäisyyn ja hoitoon (Hyväksytty Japanissa kohdunkaulasyövän hoitoon), voivat parantaa tiettyjen kasvien fytoestrogeenisiä ominaisuuksia käymisen avulla, voidaan käyttää juoksutteen ja laktobatsiliusin sijasta juustonvalmistusprosesseja ja tuottaa trombiinitulpan liuottavia entsyymejä (hyödyllisiä tromboosin hoidossa). Kummallista kyllä, samoja "beeta-glukaaneja", jotka voidaan uuttaa kiehuvalla vedellä syövän hoitoon ja immunostimulantteihin, käytetään myös öljyteollisuudessa öljyn saannon parantamiseksi, sitomalla S. Commune omituiseen palautesilmukkaan hormonitoimintaa häiritsevien aineiden tuotantoon. petrokemian tuotteita se kykenee hajottamaan ja korjaamaan.

2 ~ Kehitä DIY- ja DIWO (tee se muiden kanssa) -protokollat, jotka yksinkertaistavat näitä vastaanottajia työskentelemään EDC: n ja sienien kanssa kodifioidun tieteellisen tiedon kääntämiseksi helpommin saatavalle kielelle. Käytä näitä reseptejä koulutukseen, kyseenalaistamiseen, vastustuskykyyn molekyylisille kolonisaatioille ja uusien kertomusten luomiseen monilajien tulemisesta ja kollektiivisesta mutageneesistämme.

3 ~ Haasta hallitseva cisheteronormatiivinen, queerfobinen keskustelu, joka ympäröi hormonitoimintaa häiritseviä kemikaaleja (EDC). Lainatakseni Malin Ah-Kingin ja Eva Haywardin apurahaa näistä asioista: "Monet uutistoimistot raportoivat näistä pelottavista hormonitoimintaa koskevista tarinoista takapihoiltamme. Pyrkiessään etualalle näihin ongelmiin-kuten me seuraavassa mediassa kuvaamme, on kaasutettu Frankensteinin muodonmuutos Se uhkaa seksiä ja seksuaalisuutta. Sen sijaan, että käsiteltäisiin monia muita myrkylliseen altistumiseen liittyviä terveysriskejä, kaikkein sensaatiomaisimmat ja kiistanalaisimmat asiat herättävät keskustelua ja kriittistä vastausta. Se herättää kysymyksiä: Miksi seksi on keskeisempi kuin syöpä, autoimmuunisairaus, ja jopa kuolema? Mitkä kulttuuriset hermot (joista monet ovat globalisoituneita) laukaistaan? Ja niille meistä, joilla on feministisiä huolenaiheita, miten suuntaamme keskustelun pois olennaisuudesta, seksismistä ja heteronormatiivisuudesta? " (Myrkylliset sukupuolet).

Schizophyllum Commune on ainutlaatuinen "valkoisen rotan sieni", koska sillä on todettu olevan yli 28 000 geneettistä sukupuolta. Tämä sopeutuminen, jota monet teorioivat, on mahdollistanut tämän lajin uskomattoman geneettisen monimuotoisuuden, joka on olemassa kaikilla mantereilla ympäri maailmaa paitsi Etelämantereella. Halusimme juhlia tämän organismin kaunista seksuaalista moninaisuutta yhtenä esimerkkinä biologian erikoisuudesta. Mediassa vallitseva EDC: tä ympäröivä keskustelu ja jopa ympäristöaktivistit keskittävät voimakkaasti epätieteellisiin kertomuksiin, että nämä molekyylit aiheuttavat tiettyjä seksuaalisuuksia tai sukupuolia, joita yhteiskuntamme patologioi, leimaa ei-normatiivisia ja usein pyrkii poistamaan tai välttämään. Seksipanikoitu, outo fobinen painopiste ei ole vain EDC: n tieteellisesti epärealistinen julkinen paheksunta (hormonit ja hormonitoimintaa häiritsevät aineet eivät tee ihmisiä outoiksi tai transiksi), vaan se jättää huomiotta kaikki tuhoisat todelliset vaikutukset, jotka voimme yhdistää EDC: hen: lihavuus, kilpirauhasen häiriöt, tietyt syövät, muun muassa terveysriskit.

Vaihe 1: Etsi Schizophyllum Commune Living asuinalueeltasi

Schizophyllum Commune -laboratoriolaatuisia steriilejä viljelmiä voi ostaa noin 350 dollarilla mikrobiologiselta viljelypankilta, kuten ATCC: ltä … siksi valitsimme viljelyn luonnonvaraisista sienistä ilmaiseksi:)

Minulla oli helppoa, koska olin lukenut Schizophyllum Commune -tapahtumasta ja sattumalta huomasin sen kasvavan asuntoni edessä olevassa puussa eräänä päivänä. Jos et ole niin onnekas, että vahingossa törmäät naapurustossasi olevaan S. Communeen, sinun kannattaa mennä metsäalueelle etsimään "kannattavia" sieniä, jotka kasvavat sairaiden jalopuiden puissa (puut, jotka näyttävät siltä, etteivät ne tee liian hyvin) tai kaatuneita puita. S. Commune on yksi yleisimmistä olemassa olevista sienistä ympäri maailmaa, ja se löytyy pohjimmiltaan missä tahansa, missä on kovapuuta kasvaa.

Mushroomobserver.org tarjoaa yksityiskohtaisen kuvauksen siitä, mistä ja milloin todennäköisesti löydät S. Commune, sekä kuinka tunnistaa se ja miten välttää "samankaltaisia", jotka voivat johtaa virheelliseen tunnistamiseen:

"TUNNISTETIEDOT: Schizophyllum commune on helppo tunnistaa sen halkaistuista kiduksista, tiheistä hiuksista ja tuulettimen muotoisesta korkista. Korkki on 1-4,5 cm leveä ja yleensä kuoren tai tuulettimen muotoinen, ja sen pinta on harmaa tai vaalea. Basidiosporat ovat 5-7,5 × 2 -3 mikrometriä. Samanlainen sieni, joka tunnetaan nimellä "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa, ei ole levinnyt niin laajalti.

TAVOITTEET: Schizophyllum commune kasvaa kovapuusta käyttämällä entsyymejä ligniinin hajottamiseen ja aiheuttaa”valkoista mätänemistä”. Sitä löytyy siis useimmilta puumaisilta alueilta. Se löytyy ympäri vuoden, koska se kykenee kuivumaan, nesteytymään paremmissa olosuhteissa ja jatkamaan itiöitä.

Tämä sieni voi olla loinen pienillä halkaisijaltaan puilla, jotka ovat muiden tekijöiden, kuten kuivuuden, aiheuttaman stressin alaisia.

NÄYTÄ: Plicaturopsis crispa tai "Crimped Gill" on samanlainen kuin Split Gill. Siinä on myös kuoren/tuulettimen muotoinen hedelmärunko. Korkki on kuitenkin punaruskea tai kellanruskea, ja alapinta on hyvin erottuva. Siinä on puristettu suoni, kuten kidukset, jotka ovat paljon erilaisia kuin Schizophyllum -kunnan jaetut kidukset. Crimped Gill on harvinaisempi, mutta erottuva löydettynä."

Vaihe 2: Tee ravitsevia sokerilevyjä S. Communea varten kasvamaan

Jotta voit eristää S. Commune -kulttuurin, tarvitset joitain Petri -ruokia, jotka on täytetty sienellä. Mallasuute Agar on helppo valmistaa ruokaa S. Communea varten tai "ravinteita", jotka voidaan valmistaa helposti saatavilla olevista ainesosista. Se on myös hyvä ruokalähde käytettäväksi, kun tehdään entsymaattisia määrityskokeita S. Communen ja muiden valkoisen tai ruskean mätän sienien kanssa - ~ tämä prosessi käsitellään toisessa ohjeessa.

SIVUHUOMAUTUS: Jos sinulla oli vaikeuksia löytää S. Commune, samassa perheessä on monia muita sieniä, joita voidaan viljellä samoilla prosesseilla ja jotka ovat yhtä hyviä tai jopa parempia hormonitoimintaa häiritsevien epäpuhtauksien hajottamisessa. Turkkihäntä (Trametes Versicolor) on todettu monissa tutkimuksissa, joissa tarkasteltiin satoja valkoisia ja ruskeita mätäsieniä korkeimpina petrokemian saastumista hajottavien "lignoselluloosa" -entsyymien tuottajina. Osterisienet ovat myös erittäin hyviä tässä.

Teen mikrobiologista työtäni yhteisön biologian laboratoriossa nimeltä BUGSS (Baltimore Underground Science Space), jossa minulla on käytettävissäni lasiesineet, digitaaliset vaa'at, asteikkosylinterit, autoklaavi (väliaineen sterilointiin lämpö- ja painesteriloinnissa) jne. on syntynyt ympäri maailmaa viimeisen vuosikymmenen aikana, joten kannattaa tarkistaa tämä luettelo, onko lähelläsi sellaista. Jos alueellasi ei ole tällaista suurta yhteisön laboratoriota, sinun on investoitava tämän prosessin peruslaitteisiin, kuten:

1 ~ Digitaalinen vaaka ainesosien tarkkaan mittaamiseen

2 ~ Painekattila, joka steriloi materiaalisi lämmöllä ja höyryllä

3 ~ Petri-astiat, voi ostaa verkosta melko halvalla, uudelleenkäytettävä lasi tai kertakäyttöinen muovi toimii, mutta uudelleenkäytettävä on aina parempi:)

4 ~ Jotkut lasiastiat ainesosien sekoittamiseen, sterilointiin ja säilyttämiseen.

Jos et halua investoida laitteisiin, voit ostaa valmiiksi kaadettuja mallasuutteen agar-levyjä ostettavaksi esimerkiksi Amazonin kaltaisilta verkkosivuilta-se tulee vain kalliimmaksi pitkällä aikavälillä, jos aiot jatkaa mikrobiologista työtä.

Siellä on jo monia hienoja oppaita ja youtube -videoita siitä, miten voit tehdä itse ravinteita sisältäviä Petri -ruokia kotona. Joten sen sijaan, että menisin tähän yksityiskohtiin, linkitän vain pariin - ja annan reseptin 2% mallasuutteen agarille, joka on käyttämäsi ravinteet.

Freshcap -sienet: opas siitä, kuinka tehdä agarlevyjä sienien kasvattamiseen kotona

Mykoweb: Sieniviljelyn aloittaminen

Mallasuutteen agarin tekniset tiedot

2% mallasuutteen agaria (MEA) ~ ~ 1 litran resepti:

20 g mallasuutetta (yleinen oluenvalmistustarvike, voi ostaa verkosta)

15 g agaria (kiinteytysaine - tätä käytetään usein ruoanlaittoon, joten sitä voi ostaa verkosta tai joistakin ruokakaupoista)

1 litra H20 (käytän yleensä käänteisosmoosivettä, jota voi ostaa useimmista ruokakaupoista gallonastioissa)

Tätä reseptiä on helppo muokata, jos haluat tehdä pienempiä määriä. Valmistan usein esimerkiksi vain 250 ml kerrallaan, joten käytän vain 5 grammaa mallasuutetta, 3,75 grammaa agaria ja 250 ml vettä.

Vaihe 3: Inokoi Petri -lautasesi sienillä

Näet sieniä kutsutaan "hedelmäkappaleeksi", se on vain pieni osa organismia. Suurin osa sen kehosta on piilossa puussa (tai maassa) ja kuluttaa puuta. Tätä sienen osaa kutsutaan myseeliksi. Jos haluat viljellä Schizophyllum Commune -valkoista rihmaista, lonkeroista, juurakkoista, myseelirunkoa Petri -maljalle, otat näytteen varresta, steriloit ja asetat sen MEA -levyillesi. Sienirihma kasvaa steriloidusta sienivarren ytimenäytteestä ja asuttaa Petri -maljan, näyttäen valkoiselta puuvillamatolta.

Sinä tulet tarvitsemaan:

• Malt Extract Agar (MEA) -levyt, jotka valmistit edellisessä vaiheessa
• 70% isopropyylialkoholia (hankausalkoholi) ja suihkepullo
• Paperipyyhkeitä
• Leikkuuveitsi tai vain ruostumattomasta teräksestä valmistettu partakone - laatikkoleikkuri toimii
• metalliset pinsetit
• käsineet
• Liekki - Käytän alcohaul -lamppua instrumenttien sterilointiin, NonDisjunctionilla on loistava opetusohjelma sen tekemiseen täällä.
• Steriili pinta leikattavaksi (käytin tähän vain steriiliä Petri -maljaa)
• Parafilm, parafiinikalvo, jota käytetään Petri -astioiden tiivistämiseen - voit myös käyttää vain teippiä, jos sinulla ei ole tätä

STERIILINEN TEKNIIKKA:

Tärkein asia, jonka haluat pitää mielessä steriiliä tekniikkaa käytettäessä, on se, että bakteereja ja itiöitä putoaa jatkuvasti ilmaan, joten haluat pitää Petri -astiat peitettynä mahdollisimman paljon. Kun nostat kannet kaatamaan materiaalia tai siirrät, on aina parasta pitää kansi juuri astian yläpuolella, jolloin pääset käsiksi vaakasuoraan, mutta pidät kannen astian yläpuolella, jotta bakteerit eivät pääse sisään. ovat jättiläinen ihmis-, bakteeri-, sieni- ja muiden organismien ryhmittymä ~ ~ vaikka et näe sitä, ympärilläsi on tiheä mikrobipilvi, joka leviää kehostasi. Sen sijaan, että istuisit vain ihon pinnalla, mikrobiomisi ulottuu ilmaan ~ ~ sooooooo, älä koskaan heiluta käsiäsi petrimaljan päälle tai nojaa avoimen lautasen yli katsomaan. sinulla on ne;)

MÄÄRITÄ Puolisteriilinen työtila

Valitse ei-huokoinen työtaso, jossa ei ole roskia ja roskia. Suihkuta alue alas 70% isopropyylialkoholiliuoksellasi ja pyyhi se paperipyyhkeellä. Aseta liekki työalueen keskelle ja sytytä se. Haluat työskennellä mahdollisimman lähellä liekkiä, koska se luo pienen steriilin kentän sen ympärille. Aseta MEA -levyt toiselle puolelle ja sieninäyte steriilille leikkauspinnalle toisella puolella. Käytän yleensä steriiliä Petri -maljaa steriilinä leikkuupintana sekä työkalutukena. Kaada isopropyylialkoholia pieneen lasiin - käytät sitä terän ja pinsettien sterilointiin työskentelyn aikana.

*¡~ INOCULATE ~!*

Ennen kuin teet mitään, steriloi teräsi ja pinsetit upottamalla ne isopropyylialkhoon ja pitämällä niitä sitten liekin päällä hetken. Aseta ne steriloinnin jälkeen steriilille leikkauspinnalle, jos asetat ne alas. Pidä sienen varsi paikallaan pinseteillä ja leikkaa palanen pois sen päästä. Ota tämä palanen ja leikkaa kaikki sivut niin, että päädyt pieneen kuutioiseen sienenvarren ytimeen, jonka kaikki ulkopinnat on poistettu. Tämä auttaa pääsemään eroon kaikista muista sienessä elävistä mikrobeista, jotta ne eivät saastuta kulttuuriasi. Upota sitten varren ydin isopropyyliin noin 30 sekunniksi, vedä ulos ja anna kuivua liekin steriilissä kentässä (älä käytä liekkiä sen kuivaamiseen, se tappaa sienen). Liekkisteriloi pinsetit uudelleen odottaessasi varren ytimen kuivumista. Nosta sitten vain yhden MEA -levyn kantta juuri sen verran, että voit liu'uttaa pinsetit sivulta sisään, ja aseta varsisydän steriloiduilla pinseteillä levyn keskelle. Sulje levy parafilmillä, ja seuraavien viikkojen aikana sinun pitäisi nähdä S. Commune -myseeli kolonisoimasta levyä.

Teen yleensä useita levyjä työskennellessäni villinäytteiden kanssa, joten jos saan kontaminaation, minulla on todennäköisemmin vähintään yksi puhdas viljelmä.